Azumanga Daiou The Animation acompanha o cotidiano divertido de um grupo de garotas do ensino médio e seus professores excêntricos. A história foca em Chiyo, uma menina prodígio que entrou cedo na escola, e em suas amigas de personalidades bem diferentes, como a energética Tomo, a atlética Sakaki e a sonhadora Osaka. Entre aulas, férias e festivais escolares, o anime mostra situações simples e engraçadas da vida estudantil, com humor leve e momentos fofos de amizade.